ALZET迷你滲透膠囊 MODEL2002 使用Protocol 

概述：

ALZET

滲透泵是一種小型、可植入式的膠囊，可應用于小鼠、大鼠及其他實驗動物研

究。該膠囊無需進行外部連接或頻繁處理，就能以恒定的速率持續(xù)給藥一天到四周的時間。

LOT NO.    10212-08 

平均泵出速率  0.51      ul/HR 

標準差       0.02       ul/HR 

平均灌注體積 244.6       ul 

標準差       6.0         ul 

一、ALZET迷你滲透膠囊MODEL2002基本描述

A.性能（37℃）

泵送率  0.5 μl/hr (± 0.1 μl/hr)

持續(xù)時間 14天

膠囊容量 200ul 

B.組件

1.灌注管（filling tube）

2.流量調(diào)節(jié)器（flow moderator）

3.膠囊（pump body materials）

二、ALZET迷你滲透膠囊MODEL2002使用注意點

1. ALZET迷你滲透膠囊不可重復使用

2.膠囊必須被溶液充滿，同時需要記錄灌注量

3.溶解藥物的溶劑需與膠囊材料相兼容

4.在實驗過程中，藥物在溶劑中要保持穩(wěn)定

5.藥物的質量輸出速率用方程式ko = Q • Cd計算，ko為藥物質量輸出速率g/hr)，Q是膠囊中溶液的體積輸出速率(l/hr)，Cd為藥物濃度(g/l)

6.在對膠囊進行灌注，操作以及手術植入過程中要確保無菌

7.如果要想膠囊立刻起作用，或者膠囊中灌注的是粘性溶液，或者如果附加一根導管，那么膠囊需在無菌的37℃生理鹽水中至少孵育4-6小時（是隔夜）

8.如果膠囊使用的環(huán)境與正常的哺乳動物的體溫以及滲透壓顯著不同時，膠囊的泵送率可能會受到影響。

9. 膠囊在給藥完成后或植入21天內(nèi)需取出，如超時，膠囊附近組織內(nèi)的水分會進入膠囊，導致局部組織隆起，并處于高鹽狀態(tài)，對機體組織產(chǎn)生傷害。

10.通過與導管連接，ALZET迷你滲透膠囊可向動靜脈循環(huán)，大腦，器官，內(nèi)腔等持續(xù)提供藥物。

11.在實驗過程中通過監(jiān)測血藥濃度可以驗證膠囊實驗的正確性，同時通過查看試驗完成后膠囊中藥物的剩余量，以及進行體外實驗等也可驗證。

三、ALZET迷你滲透膠囊灌注方法步驟

藥物充滿膠囊很重要，正確的灌注方法下面已經(jīng)給出。膠囊中有氣泡或者不能正確將流量調(diào)節(jié)器插入膠囊將會導致不可預測的藥物泵送率波動。

在灌注和植入過程中應戴手套；另外大量的油脂如果在皮膚表面聚積，可能會影響膠囊性能；如果膠囊被污染了，應用70%的異丙醇擦拭，切忌不能用異丙醇浸泡；注意要在常溫下灌注藥物。

STEP1：稱量空膠囊以及它的流量調(diào)節(jié)器（總重）

STEP2：利用27式灌裝管以及1ml的注射器灌裝膠囊。若使用較大注射器，由于灌裝速度過快，可能會在膠囊中產(chǎn)生氣泡。用注射器抽取藥物溶液，裝上灌裝管。需要注意的是注射器和與其連接的灌裝管之間不能有氣泡。

STEP3：拔掉流量調(diào)節(jié)器，將膠囊直立，從膠囊頂部的小開口插入灌流管，直到不能再插入為止。此時灌流管的接近膠囊的底部。

STEP4：保持膠囊直立，緩慢推注射器的活塞。當藥物溶液到達膠囊頂部小開口處停止灌注，小心移去灌注管（速度快了可能會產(chǎn)生氣泡）。

STEP5：擦掉溢出的藥物溶液，插入流量調(diào)節(jié)器直到白色帽子到達膠囊頂部為止。插入的流量調(diào)節(jié)器將會取代部分已經(jīng)灌注到膠囊中的藥物溶液，溢出的溶液需要擦干凈。確保該裝置正常運行，需要將流量調(diào)節(jié)器全部插進膠囊中。

STEP6：稱量灌滿后的膠囊（連同流量調(diào)節(jié)器），步驟6和步驟1的差值為灌注的藥物溶液的凈重。對于大多數(shù)稀釋的水溶液，重量（mg）=體積（ul）。灌注的體積應該大于平均灌注體積（Mean Fill 

Volume）的90%，即244.6*0.9=220.41。如果是這樣的話，灌裝后的膠囊就可以使用了，如果不滿足以上條件，說明膠囊中含有氣泡，不能使用。

如果在灌注過程中阻力較大，可在灌注過程中將灌注管小角度翹起，灌注的小孔可通過來回移動灌注管而擴大，或者在插入灌注管之前多次插入及拔出流量調(diào)節(jié)器以達到擴大灌注孔的目的。

四、藥物溶液如何配制及與膠囊的兼容性膠囊與水，稀釋的酸，堿溶液以及與稀釋的或低濃度的

DMSO，酒精兼容，也與丙烯和聚乙二醇兼容。ALZET膠囊與脂肪族，芳香烴類化合物不兼容，例如庚烷，甲苯，動植物油脂。使用不兼容的溶劑可能導致膠囊喪失功能。下表提供了一些與膠囊兼容的常用的已知溶劑。

注意，以上溶劑只是與膠囊材料相兼容，實際操作過程中，還要注意是否與組織或體液兼容。

溶液在膠囊中產(chǎn)生氣泡可能會影響藥物的泵送率，溶液中如果含有一些沉淀的不溶顆粒時需要過濾后使用，ALZET泵能夠泵出均質的粘性溶液（粘度小于100000厘泊），懸浮液如果不沉淀也能被泵出。為了確保泵出速率的一致性，在持續(xù)泵出過程中懸浮液需保持均質。

五、ALZET滲透膠囊體內(nèi)植入手術

ALZET滲透膠囊可被植入動物皮下，動物重至少20g。首先在肩胛骨間的皮膚處切一小口，然后用止血鉗將皮膚和皮下結締組織分開，形成一個小的袋。將膠囊插入，流量調(diào)節(jié)器朝里，皮膚開口可縫合或者用夾子夾住。

LZET滲透膠囊可被植入動物腹部，動物重至少150g。首先在動物胸腔下面皮膚開一個中線小口，然后在皮膚下的腹部肌肉處開一個小口，將膠囊流量調(diào)節(jié)器朝內(nèi)插入腹部。肌肉開口用線縫合，皮膚開口可用線縫合也可用夾子夾住。

六、ALZET滲透膠囊的檢測

ALZET是精密的給藥工具，泵送率和灌注體積已經(jīng)給出，膠囊在4-6小時的啟動時間后，給藥速率趨于恒定，直到剩余5%的藥物時，泵送率迅速下降，直到0為止。

DURECT方法是在37℃（+-0.5℃）下，0.9%的生理鹽水中離體測量泵送率，這種方法具有較好的可重復性。

A.離體質量檢測

選取20個相同型號膠囊作為隨機樣本，膠囊中充滿染液。充滿后，膠囊浸沒在0.9%的生理鹽水（37℃）中，每隔一定時間將膠囊轉移到含有新鮮生理鹽水的試管中，直到第14天，對膠囊中泵出染料進行標準分析。在4-336h過程中，每個膠囊都以恒定速率泵出染料。通過DURECT實驗，每個膠囊的時間依賴泵送率變量系數(shù)小于10%，均值的標準誤為5%。

B.啟動時間

如果膠囊在室溫下灌注，浸沒到等滲的生理鹽水（37℃），泵送率在幾小時內(nèi)不會達到穩(wěn)定。如果實驗要求立即給藥，DURECT建議將未灌注藥物的膠囊浸沒在0.9%的生理鹽水中4-6小時（隔夜37℃），如果與導管相連或者灌注粘性藥物時，以上步驟必須進行。

C.藥物持續(xù)泵送的驗證

藥物持續(xù)泵送可通過方程D = (V/Q) (.95)驗證，D是持續(xù)時間，V是規(guī)格書中給出的膠囊泵送容量體積（ul），Q是泵送率（ul/hr）。

七、驗證ALZET滲透膠囊的準確性

為了驗證實驗結果是否來自持續(xù)給藥，DURECT建議ALZET膠囊使用者在實驗過程中的幾個時間點檢測血液藥物水平。注意不能將zui后膠囊中剩余空間作為泵出的藥物量，因為在實驗過程中，膠囊會吸收水分，同樣，切開一個用完的膠囊來驗證其性能也是不可靠的。

A.確定平均泵送率

ALZET迷你滲透膠囊的容量體積稍微大于14天泵出的溶液量。zui后，會有一些藥物溶液殘留在膠囊內(nèi)，可用灌注管和1ml的注射器吸走。用額外的溶劑沖洗膠囊，對剩余藥物溶液進行分析，算出殘余藥物量。平均泵送率=（起始藥物量-殘余藥物量）/運行時間。

B.確定離體實驗泵送率

ALZET迷你滲透膠囊給出的體積泵送率是在等滲的生理鹽水（37℃）中測定的，用戶發(fā)現(xiàn)檢測泵送率是必需的。DURECT給出了以下步驟：

Step1：準備一種能溶于生理鹽水的已知濃度溶液作為指示劑。泵出的指示劑的量作為計算泵送率的基礎。指示劑必需與膠囊相兼容，同時還容易在等滲的生理鹽水中進行分析。

Step2：根據(jù)第三部分的方法將指示劑溶液灌注到膠囊中。

Step3：將膠囊放進一只裝有15ml等滲生理鹽水的20ml試管中，在37℃中進行預孵育，用塞子塞住試管，以防蒸發(fā)。