顧名思義，熒光二抗通常指代的就是帶熒光團(tuán)標(biāo)記的二抗，這樣的二抗可以通過觀察其在不同波長下熒光的強(qiáng)度來確定其二抗的含量。常見的熒光團(tuán)包括FITC、Rhodamine、Texas Red、PE、Cy系列等。比如FITC即異硫氰酸熒光素，是目前應(yīng)用zui廣泛的熒光素。zui大吸收光波長為490～495nm，zui大發(fā)射光波長為 520～530nm，呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光。其優(yōu)勢(shì)是分子量較小為389.4，每一個(gè)抗體可標(biāo)記幾個(gè)FITC分子，而且人眼對(duì)黃綠色較為敏感，因此具有很好的對(duì)比度其缺點(diǎn)是淬滅快。羅丹明（Rhodamin）及其衍生物則是一群帶黃紅色熒光的熒光素，包括TRITC、Texas Red等。羅丹明及其衍生物與FITC的綠色熒光對(duì)比鮮明，可配合用于雙重標(biāo)記或?qū)Ρ热旧Ｒ蚱錈晒獯銣缏?，也可用于單?dú)標(biāo)記染色，但是其熒光強(qiáng)度偏弱，其中Rhodamin比Texas Red熒光又要偏弱。艾美捷能為客戶提供全系列的各種*熒光二抗，包括Jackson的大包裝粉末形式的熒光二抗，另外，也提供EarthOx的小包裝液體形式熒光二抗，均具有很高的性價(jià)比。更多二抗產(chǎn)品，請(qǐng)查看：艾美捷二抗產(chǎn)品。

花箐素Cy是另一類熒光團(tuán)，包括綠色的Cy2、黃紅色的Cy3、紅色的Cy5、近紅外的Cy5.5等熒光染料，由于結(jié)構(gòu)的稍微區(qū)別，其吸收和發(fā)射波長也有所區(qū)別。比如Cy2耦聯(lián)基團(tuán)激發(fā)波長為492nm，發(fā)光為波長510nm的綠色可見光。Cy2和FITC使用相同的濾波片，但是要避免使用含有磷酸化的苯二胺的封片劑，因?yàn)檫@種抗淬滅劑和Cy2反應(yīng)，在染色片儲(chǔ)存后會(huì)導(dǎo)致熒光微弱和擴(kuò)散。Cy3和Cy5比其他的熒光團(tuán)探針要更亮，更穩(wěn)定，背景更弱。Cy3耦聯(lián)基團(tuán)激發(fā)光的zui大波長為550nm，zui強(qiáng)發(fā)射光為570nm。因?yàn)榧ぐl(fā)光和發(fā)射光波長很接近TRITC, 在熒光顯微鏡中，可使用和TRITC一樣的濾波片。Cy5可以和很多其他的熒光基團(tuán)一起用在多標(biāo)記的實(shí)驗(yàn)中。由于它的zui大發(fā)射波長在670nm，Cy5很難用裸眼觀察，而且不能用汞燈作理想的激發(fā)。通常觀察Cy5時(shí)采用具有合適激發(fā)光和遠(yuǎn)紅外檢測(cè)器的共聚焦顯微鏡。下面我們看一組熒光二抗的比照?qǐng)D片：

我們知道，F(xiàn)ITC的綠色熒光強(qiáng)度肉眼觀察已經(jīng)很亮了，但是從左上面的圖可見，與Cy2相比還是偏弱，而Dylight 488則更勝*；右上圖是不同熒光團(tuán)在含有90%甘油的PBS里的熒光淬滅情況，由圖可見。FITC的淬滅都很快，Cy2其次，而Dylight 488和Alexa 488都具有很好的光穩(wěn)定性。下面再看另一組有關(guān)于紅色熒光的數(shù)據(jù)：

由左上圖可見，Dylight 594比Alexa 594和Texas Red的熒光強(qiáng)度都要強(qiáng)，Dylight 594的特異性也很好；同樣，右上圖顯示Dylight 594的光穩(wěn)定性也很優(yōu)異。那么Dylight到底是一種什么樣的熒光團(tuán)？不管在結(jié)構(gòu)以及功能和應(yīng)用上，Dylight都是一種新的熒光團(tuán)，與傳統(tǒng)的熒光團(tuán)相比，其分子量相對(duì)較小，因此一個(gè)大分子上可以標(biāo)記更多的Dylight，同時(shí)單個(gè)的Dylight熒光團(tuán)，其熒光強(qiáng)度更強(qiáng)，特異性更好；Dylight對(duì)光更穩(wěn)定，這意味著其具有更高的抗淬滅性，不像FITC因?yàn)榭焖侔l(fā)生淬滅而無法及時(shí)捕捉到熒光圖像。Dylight還有一個(gè)優(yōu)勢(shì)是種類很全，比如做三標(biāo)的時(shí)候，除了常見的紅色和綠色熒光，藍(lán)色熒光應(yīng)該是第三選擇，Dylight 405就是藍(lán)色的。Dylight 488是綠色的，可*替代FITC；*替代Cy3和Rhodamin的Dylight 549；替代Texas Red的Dylight 594；Dylight 633和Dylight 649則是更強(qiáng)的紅色熒光；另外，Dylight還有適配Odyssey系統(tǒng)的近紅外和遠(yuǎn)紅外二抗，分別是Dylight 680和Dylight 800。

可能還需要考慮的一個(gè)問題是價(jià)格的問題，其實(shí)Dylight的熒光二抗與常規(guī)熒光二抗相比，具有更高的性價(jià)比，一般來說，Dylight的價(jià)格比常規(guī)二抗只高20%左右，但是Dylight的效價(jià)通常是常規(guī)熒光二抗的2-4倍左右，因此就zui終的性價(jià)比，Dylight更勝*。舉例來說，EarthOx的FITC標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG二抗（貨號(hào)為E031210），100μl是￥160；而相應(yīng)的EarthOx的Dylight 488標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG二抗（貨號(hào)為E032210），100μl報(bào)價(jià)是￥240，但是在具體使用時(shí)，比如免疫熒光實(shí)驗(yàn)，其推薦稀釋比率分別為1:100和1:400，即100μl的FITC標(biāo)記山羊抗小鼠IgG二抗（貨號(hào)為E031210）zui終使用液是10ml，而100μl的Dylight 488標(biāo)記山羊抗小鼠IgG二抗（貨號(hào)為E032210）zui終使用液是40ml，可見，即使不考慮Dylight更高的熒光強(qiáng)度、更好的光學(xué)穩(wěn)定性和特異性，但就價(jià)格來說，Dylight熒光二抗也具有更高的性價(jià)比。

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