realtimeprimers qPCR 預混液簡介

qPCR Master Mix- 新的高性能快速綠色 qPCR Blue Master Mixes

qPCR 預混液 AzuraQuant™ Green 和 Probe Fast qPCR 預混液用于實時 PCR 實時 PCR 引物酶：AzuraQuant™ Green Fast qPCR 預混液是一種即用型 2x 預混液，用于實時定量 PCR 分析，其中嵌入染料-基于檢測提供了擴增后熔解曲線的選項。該系統包含 Vivid-Green™ 染料，這是一種新型熒光 DNA 結合染料，與 SYBR® Green 相比，它在與雙鏈 DNA 結合時產生最小的 PCR 抑制和更強的熒光。 AzuraQuant™ Green Fast qPCR Mix 包含 Azura HS Taq DNA 聚合酶、優化的緩沖化學成分和專有的 DNA 結合染料，可提供穩健的實時 PCR，具有更早的定量循環值 (Ct) 和廣泛的檢測范圍，從而提高靈敏度、速度、可靠性和再現性。AzuraQuant™ Green Fast qPCR Mix 幾乎不需要優化，可用于量化任何 DNA 模板，包括 cDNA、基因組 DNA 和低拷貝病毒靶標。 AzuraQuant™ Probe Fast qPCR Mix 是一種即用型 2x 預混液，可用于實時定量 PCR 分析，專為探針檢測技術而設計，包括 TaqMan®、Scorpions® 和分子信標探針。 為了確定儀器兼容性和最合適的 ROX™ 變體，請從下面的 AzuraQuant™ 產品中進行選擇。

PCR 陣列 靶向實時 PCR 引物組庫（10 uM，40 ul） 最多可進行 200 個 PCR 陣列！每個陣列 2 美元！（基于 10 ul 反應體積） 靈活設計自己的實驗 微孔板包含 88 個靶向引物和 8 個管家基因引物組（每孔 20ul，10uM 濃度） 注意：引物文庫不提供引物序列

定量實時 PCR 引物套裝

我們的目標是提供一種具有成本效益的方法來驗證 NGS 或微陣列數據并使用實時 qPCR 測定定量基因表達

執行多達 1000 次測定

提供有關最佳反應條件的詳細信息 提供

引物序列?。?！

概述 - 定量“實時"PCR 或 qPCR

定量實時 PCR *改變了我們測量核酸濃度的能力，并且是驗證由微陣列分析和其他基因組學技術生成的表達數據的重要步驟。實時 qPCR 儀器的開發促進了這一點，該儀器可測量反應每個步驟或“實時"產生的 qPCR 產物的量。SYBR green 是目前流行的實時 PCR 方法，因為它相對容易和可靠。在實時 PCR 技術發展之前，定量測量需要建立多個 PCR 反應，以便在擴增的線性階段捕獲 qPCR 產物。然后通過凝膠電泳或 HPLC 對 PCR 產物進行分離和定量。這些實驗非常費力，實現正確定量所需的操作次數增加了引入錯誤的可能性。因此，可以在每個熱循環中測量 PCR 產物的實時 PCR 儀器的開發提高了定量 PCR 的簡便性、準確性和可重復性。由于實時 PCR 的發現，出現了各種應用。這些包括 1) 驗證通過微陣列分析或下一代測序 (NGS) 獲得的基因表達數據，2) DNA 拷貝數的測量，3) 病毒顆粒和潛在致命微生物的檢測和定量，4) 突變/SNP 分析，以及5）miRNA表達。可以在每個熱循環中測量 PCR 產物的實時 PCR 儀器的開發提高了定量 PCR 的簡便性、準確性和可重復性。由于實時 PCR 的發現，出現了各種應用。這些包括 1) 驗證通過微陣列分析或下一代測序 (NGS) 獲得的基因表達數據，2) DNA 拷貝數的測量，3) 病毒顆粒和潛在致命微生物的檢測和定量，4) 突變/SNP 分析，以及5）miRNA表達?？梢栽诿總€熱循環中測量 PCR 產物的實時 PCR 儀器的開發提高了定量 PCR 的簡便性、準確性和可重復性。由于實時 PCR 的發現，出現了各種應用。這些包括 1) 驗證通過微陣列分析或下一代測序 (NGS) 獲得的基因表達數據，2) DNA 拷貝數的測量，3) 病毒顆粒和潛在致命微生物的檢測和定量，4) 突變/SNP 分析，以及5）miRNA表達。

通常，實時 PCR 協議類似于標準 PCR 反應。同樣的問題也適用于產生干凈的模板、設計引物和優化反應條件。主要區別在于加入了嵌入劑（例如 SYBR green）或使用熒光引物檢測 PCR 產物。在典型的反應中，qPCR 產物以指數方式產生。因為足夠的產品需要幾個循環才能很容易檢測到，所以熒光與循環數的關系圖呈現出 S 形外觀。在隨后的循環中，反應底物耗盡，qPCR 產物不再加倍，曲線開始變平。曲線上熒光量開始迅速增加的點，通常比基線高幾個標準偏差，稱為閾值循環（Ct 值）。Ct 與模板的關系圖是線性的，因此多個反應之間的 Ct 值比較可以計算目標核酸的濃度。這條線的斜率提供了 qPCR 效率的度量。

PCR產物可以通過產生標準曲線來定量或相對于對照基因進行定量?；跇藴是€的實時 PCR 定量可以利用質粒 DNA 或其他形式的 DNA，其中每個標準的絕對濃度是已知的。然而，必須確定的是，標準品的 PCR 效率與“未知"樣本的效率相同。在某些情況下，從純化的靶標進行 PCR 可能比使用復雜核酸混合物觀察到的更有效。相對定量方法稍微簡單一些，因為它需要測量管家或對照基因來標準化目標基因的表達。然而，選擇合適的對照基因可能會導致問題，因為它們不一定在所有未知樣本中均等表達。

執行實時 PCR 的一個關鍵方面是從高純度的模板開始。在處理一些生物樣本時，這可能具有挑戰性。幸運的是，已經開發了許多商業產品來促進高純度核酸的分離。去除污染的苯酚和不需要的 DNA 是需要考慮的步驟。對于基因表達研究，必須使用高純度試劑和多次重復進行逆轉錄，因為此步驟可能會在模板復制中引入可變性。逆轉錄可以在實時 PCR 之前進行，或者可以合并到擴增程序中。