中文名：抗纖溶酶

英文名：α2-Antiplasmin

英文簡稱：α2-AP

產(chǎn)生器官：肝臟

簡介：α2-抗纖溶酶(α2-Antiplasmin， α2-AP)是由肝臟合成分泌的，含有452個(gè)氨基酸的單鏈糖蛋白，分子量為70 000，屬于絲氨酸酶抑制物家族成員之一，在人血漿中α2-AP是主要的纖溶酶抑制物，在控制纖溶中起關(guān)鍵作用。

實(shí)驗(yàn)：

為此制備α2-AP單克隆抗體，建立ELISA方法用于纖溶系統(tǒng)的監(jiān)測(cè)，為進(jìn)一步提高抗原的免疫原性，減少抗原用量，延長抗原釋放時(shí)間，用大分子惰性物質(zhì)如硝酸纖維素膜(NC膜)作為抗原載體進(jìn)行脾內(nèi)包埋免疫。我們將抗原吸附于NC膜上，沿小鼠左肩正中線下胸背部縱形切口1 cm長，逐層入腹，輕輕牽出脾臟，以刀尖沿脾縱軸輕劃一小口，置入1個(gè)三角形載有α2-AP抗原的NC膜，使之*包埋于脾臟內(nèi)，觀察無出血后回納脾臟，依次縫合傷口。

間隔3 w后，用同樣方法再進(jìn)行1次，于加強(qiáng)免疫后第3天取小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞(5∶1)，用PEG-4000常規(guī)方法進(jìn)行融合[2,3]，HAT培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)，當(dāng)克隆長至1/10孔大小時(shí)，采用間接ELISA法篩選分泌抗體陽性雜交瘤細(xì)胞株，并采用有限稀釋法對(duì)陽性雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行亞克隆，建立了2株穩(wěn)定分泌抗-α2-AP單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，分別命名為3H4和2E3，并用α2-AP采用常規(guī)方法免疫家兔，制備抗-α2-AP多克隆抗體血清。

對(duì)其中的1株3H4進(jìn)行研究，其雜交瘤染色體眾數(shù)為96.37±1.90，分泌的抗體為IgG1亞類，kappa型。ELISA檢測(cè)腹水效價(jià)1∶106，采用飽和硫酸銨鹽析法從腹水純化McAb　3H4,SDS-PAGE檢測(cè)有較高純度。3H4抗體對(duì)α2-AP標(biāo)準(zhǔn)品為陽性反應(yīng)，而對(duì)ATIII及纖維蛋白原均為陰性，說明對(duì)其無交叉反應(yīng)。此雜交瘤細(xì)胞株3 d傳1代，體外傳代培養(yǎng)6個(gè)月以上，ELISA檢測(cè)抗體滴度無明顯降低。采用ELISA法檢測(cè)正常人血漿α2-AP含量，以純化的McAb 3H4包板，兔抗α2-AP為多抗，辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔IgG作為三抗，以ABTS為底物，ELISA法檢測(cè)了30名正常人枸緣酸鈉抗凝血漿(1∶9)α2-AP含量，其結(jié)果為(98±1.99) mg/L。

應(yīng)用范圍：由此可見，制備α2-抗纖溶酶單克隆抗體用以檢測(cè)α2-AP，對(duì)于了解肝病、血栓性疾病、DIC等許多疾病纖溶改變有著廣泛的應(yīng)用前景，并可用于溶栓治療監(jiān)測(cè)[1]

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